Apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió

Az invázió során történő szekréció után a RON4 L1 az MJ-hez kapcsolódik, és a gazdaszerkezet membránjának citoszolikus felületére irányul.

RON4 L1 knock-out sejtvonalat hoztunk létre, és megmutattuk, hogy nem lényeges a vizes ciklusban, bár a mutáns paraziták kevésbé hatékonyan megölik az egereket. Bevezetés Az Apicomplexa paraziták felelősek az emberi és állati betegségekért.

A patkány jelentős emberi patogéneket, például maláriaért felelős Plasmodium fajokat vagy Toxoplasma-t, a toxoplazmózis hatóanyagát tartalmazza.

Bevezetés a protisztológiába

Az inváziós folyamat döntő lépés ezeknek a kötelező intracelluláris parazitáknak, és többnyire konzerválódik az egész menedékhelyen. A legtöbb esetben egyedülálló, a Apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió Junction MJ nevű funkció kialakítását jelenti. Az MJ a gazdasejt és a parazita plazma membránok közötti szoros elhelyezés. Ezt a szerkezetet először ban Plasmodium knowlesi merozoiták vörösvérsejtekbe 1 belépő elektronmikroszkópos megfigyelésével figyelték meg, majd a molekuláris jellemzése megkezdődött a Toxoplasma tachyzoites-ban a betegség akut fázisáért felelős parazita invazív formája.

Az MJ molekuláris komponensei az Apicomplexa-specifikus fehérjék 2, 3, 4, 5, amelyek a parazita két különálló apikális organelljéből, a mikronemekből és az rhoptriumokból választódnak ki, az utóbbi sajátos klub alakú szerkezetű, vékony csatornával vagy nyakkal és egy hagymás rész 6. Meg kell jegyezni, hogy a RON8 nem általánosan konzervált, de úgy tűnik, specifikus a kokcidid parazitákra, mint például ToxoplasmaEimeria és Neospora 5. A RON2 a gazdaszervezet plazmamembránjába van behelyezve és egy rövid szegmenst mutat ki a gazdasejt felületén, amely kölcsönhatásba lép az AMA1 8, 9-vel.

Az AMA1 és RON2 így egy 10, 11 intim érintkezőt képez, amely szoros és visszafordíthatatlan kölcsönhatást generál a parazita és a gazdasejt között.

Ezzel ellentétben nem volt lehetséges a knock-out mutánsok előállítása RON2 12 és RON5 16 esetében, ami a kritikusabb szerepet játszik az invázió során. Ezzel ellentétben a RON2, RON4 vagy RON5 kimerülés az MJ komplex többi tagjának expresszióját és célzási hibáit indukálja, ami valójában tripla funkcionális mutánsokhoz vezet, így korlátozva az egyes RON funkciók 12, 13, 14, 16 fenotípusos felbontását.

Posts navigation

A legújabb vizsgálatok azt mutatták, hogy egy MJ képződhet az AMA1 hiányában is tachyzoitákban 12, 17, Ez nemcsak az MJ komponensek valószínűleg funkcionális redundanciáját emelte ki, hanem az MJ fehérjékben is sokféle változatot javasolt, ami arra utal, hogy további komponensek maradtak felfedezésre.

A 22, 23 RON4L1 gén transzkripciós bizonyítékán kívül semmi sem volt ismert a megfelelő fehérje tényleges lokalizációjáról vagy szerepéről a parazitában.

Ebben a jelentésben tovább vizsgáljuk az MJ komplex molekuláris összetételét egy új rhoptry nyakfehérjével, a RON4 L1-vel jellemezve, amely szekvenciahomológiát oszt meg a RON4-vel, és erősen kifejeződik tachyzoitákban. Kimutattuk, hogy a RON4 L1 az MJ-komplex új tagja, amely az MJ-ben jelen van, és a befogadás során a gazdaszerkezet membránjának citoszolikus felületén van jelen.

Bevezetés a protisztológiába | Digitális Tankönyvtár

Sikeresen létrehoztuk a RON4 L1 gén közvetlen kiütését. Apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió RON4 L1- felhalmozódott paraziták hasonlóan hatnak a sejtekbe, mint az in vitro kontrollokde az egerekben szignifikánsan károsodnak a virulenciában. Összefoglalva, eredményeink jobban megértik az MJ architektúrát, és támogatják a funkcionális és független MJ komplexek meglétét T.

Eredmények A RON4 L1 egy új rhoptry nyakfehérje A ToxoDB transzkriptomikus és proteomiás adatsorai azt mutatják, hogy a RON4 L1 a tachyzoite, a bradyzoite és a sporozoita szakaszokban, valamint a macska enteroepithelialis szakaszában www.

Egy előre jelzett szignálpeptid mellett nem lehet transzmembrán domént vagy más ismert ismert domént azonosítani. A RON4 L1 lokalizálásához először égő lehelet C-terminális végén háromszoros hemagglutinin-tagral HA 3 jelöltük a fehérjét az endogén lokuszon végzett egyszeri rekombinációval, amint azt korábban a 24 ábrán ismertettük és az 1a.

Egy klónt választottunk ki és apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió Giardia sintomas cao a megfelelő konstrukció integrálásához 1b. Az anti-HA antitesteket alkalmazó IFA kimutatta, hogy a parazitáknak csak egy töredéke mutat egy HA 3 -tag-jelet, bár ha jelen van, akkor a megfigyelt jel emlékeztet a fejlődő gyógyszer enterobiasis és ascariasis kezelésére előtti rhoptriás rekeszeire az adatokat nem ábrázoltuk.

Mivel az éretlen pre-rhoptry és az érett organelle közötti átmeneti lépésben sok rhoptry-fehérjét feldolgoznak a szekréciós útvonalban, ez a címkézés arra utal, hogy a RON4 L1 egy rhoptry-fehérje, amely potenciálisan C-terminális proteolitikus érésen megy keresztül.

Ennek a hipotézisnek az ellenőrzéséhez először a Pro-ROP4 25 pre-rhoptry jelölővel közösen lokalizáltunk. Ábra, felső panelmíg az anti-RON2 antitestekkel detektált érett apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió hiányoznak 1c.

Ábra, alsó panel. Ez azt jelezte, hogy a RON4 L1 valószínűleg a szekréciós útvonalon halad át, a pre-rhoptriáknak szól, és C-terminális hasításon megy keresztül az emberkereskedelem során érett organellákhoz. Ezt a hipotézist megerősítjük, majd hozzáadtunk egy tagot a fehérje N-terminális részéhez, hogy kövessük az érett fehérjét. Ábraspecifikus donorszekvenciát használva S2 ábra mint sablonként.

A PCR-amplifikációk 2b. A C-terminális jelöléssel ellentétben a fennmaradó HA 3- RON4 L1 paraziták olyan apikális jelölést mutattak, amely tökéletesen együtt lokalizálódott a RON2 rhoptry nyakjelzővel 2c ábra.

• Parazita gazdaszervezet rendszer
• Opisthorchiasis eredmény: 1 nem A sejtekbe jutva azok anyagcserefolyamatait úgy változtatják meg, hogy a bonyolult biokémiai folyamatok újabb vírusrészecskék létrehozását eredményezik.
• Intracelluláris paraziták a gazdaszervezetben
• A paraziták védelmet nyújtanak a gazdaszervezet immunválaszával.
• Mi a végső parazita gazdaszervezet

Az RON4 L1 epitóp jelölése. A genetikai módosítás és a PCR-termék méretének ellenőrzésére használt primerek jelennek meg.

Az anti-HA antitestek csak a pre-rhoptrieseket megfestik.

Mérlegrudak, 5 µm. A donorfragmens recodonizált DNS-szekvenciája kikelt. ROP5, betöltési vezérlés. Teljes méretű kép Az anti-HA antitesttel végzett Western blot analízis azt mutatta, hogy a C-terminálisan jelölt sejtvonal fehérje kivonataiban halvány, nagy molekulatömegű terméket figyeltünk meg, amely valószínűleg megfelel a feldolgozatlan formának 2d.

Míg ezt a formát az N-terminálisan jelölt sejtvonal lizátumaiban is kimutattuk, a fő termék alacsonyabb molekulatömegű volt 2d. Számos alacsonyabb sávot, esetleg további feldolgozási vagy lebomlási termékeket is felismertünk 2d. Összefoglalva, a RON4 L1 egy új rhoptry nyakfehérje, amely C-terminális hasításon megy keresztül a rhoptry érés során 2e.

Annak érdekében, hogy megtudjuk, hogy a RON4 L1 az invázió során szekretálódik, a HA 3- RON4 Apicomplexan paraziták általi gazdasejt invázió parazitákon IFA-kat alkalmaztunk anti-HA antitestek alkalmazásával, és a permeabilizációs körülmények csak a 26 parazita által kiválasztott anyag kimutatására optimalizáltak.